A)Phương pháp dùng đầu dính

Ở pp này vertor chuyển gen là adn vòng tròn đc cắt bởi 1 loại restriction enzyme(EcoRI)chuyển thành dạng thẳng có 2 đầu cố kết.Các phân tử ADN of bộ gen khác cũng đc cắt = cùng 1 loai RE sẽ tạo thành nhiều đoạn ADN thẳng có các đầu cố kết.Trộn lẫn ADN lạ và vertor chuyển gen đã bị cắt bởi cùng 1 loại RE như ở trên.cÁC đầu cố kết of 2 loại ADN lạ và vertor chuyển gen sẽ sẽ bắt cặp lại với nhau.Enzyme nối ligase sẽ nối ADN lạ với vertor chuyển gen = cầu nối phosphodiester tạo nên fan tử ADN tái tổ hợp.PP này đc use dụng rộng rãi để lập ngân hàng gen of 1 sinh vật.

B)PP dùng các đoạn nối

Các đoạn nối là các đoạn oligonucleotide có chiều dài từ 10-20 nucleotide đc tổng hợp.Trong mỗi đoạn linker phải mang trình tự nhận biết đặc hiệu của 1 RE nào đó.Sau đó dùng enzyme DNA ligase of phage nối các đoạn này lại với nhau.Các đoạn nối sẽ gắn vào 2 đầu của đoạn ADN lạ và khi bị cắt = enzyme giới hạn sẽ tạo 2 đầu cố kết of EcoRI.Nhờ đó mà ADN lạ có thể gắn vào vertor chuyển gen cũng bị cắt bởi EcoRI,mặc dù trc đó ADN lạ k có trình tự nhận biết đặc hiệu dối với enzyme giới hạn.PP này đc sử dụng trong trường hợp ADN lạ và vertor chuyển gen k có cùng trình tự nhận biết đối với enzyme giới hạn.

C) PP dùng enzyme terminal transferase

PP này dựa vào khả năng đặc biệt của enzyme terminal transferase có thể gắn cùng 1 loại nucleotide thành chuỗi vào đầu mút 3'OH of mạch ADN

Theo mô tả,vertor chuyển gen và ADN lạ cần gắn đc cắt bởi exonuclease or enzyme giới hạn( vd Pst I).Sau đó vertor chuyển gen đc ủ với enzyme terminal transferase và 1 loại nucleotide(vd dGTP) kết quả tạo thành ở 2 đầu mút 3'OH of vertor chuyển gen 1 đoạn poly G(3'GGGGG)Đoạn ADN lạ sau khi bị cắt bởi exonuclease cũng đc ủ với enzyme terminal transferase nhưng bổ sung vào môi trường ủ là dCTP để tạo đuôi 3'CCCCC bổ sung với đoạn 3'GGGGG of vertor.Nhờ đó mà ADN lạ có thể gắn vào vertor do bắt cặp bổ sung giữa G và C.Giai đoạn cuối cùng là dùng enzyme ADN polymerase I gắn các nucleotide tương ứng vào chỗ trống và ligase hàn gắn ADN lạ với vertor tạo nên ADN tái tổ hợp.Với pp này có thể gắn ADN lạ vào bất kỳ vertor chuyển gen nào.